La modification génétique de lymphocytes T pour qu’ils expriment des récepteurs chimériques spécifiques d’un antigène tumoral permet d’améliorer leur immunogénicité. Si l’utilisation de lymphocytes T exprimant des récepteurs chimériques s’est avérée efficace dans plusieurs modèles murins, cette approche n’aura qu’un bénéfice clinique limité in vivo chez l’homme en partie dû au fait que ces cellules sont connues pour y avoir une persistance limitée. A l’inverse, les lymphocytes T cytotoxiques spécifiques du virus d’Ebstein-Barr (CTL anti-EBV) ont la capacité de proliférer et de survivre in vivo sous l’effet de la stimulation antigénique chronique par le virus latent. Ces CTL anti-EBV lysent des cibles cellulaires tumorales porteuses de certains des antigènes de l’EBV. Nous appuyant sur ces connaissances, nous avons évalué l’effet cytotoxique sur des blastes de leucémie aiguë myéloblastique CD33+ de CTL-anti-EBV génétiquement modifiés par transfert rétroviral pour qu’ils expriment un récepteur T chimérique anti-CD33? (EBV-CTL-CD33?. Nous avons vérifié que ces EBV-CTL-CD33?possèdent une double spécificité conférée à la fois par le récepteur chimérique et par le récepteur T natif dirigé contre les antigènes de l’EBV. Nous avons également étudié si l’incorporation du domaine intracellulaire du signal de costimulation CD28 au récepteur chimérique pouvait améliorer la survie et l’activité antitumorale des EBV-CTL-CD33?, et si l’addition de ce signal de costimulation augmentait la génération de cellules T « mémoire » anti-CD33.

Les CTL anti-EBV de cinq donneurs sains EBV+ ont été générés par stimulation hebdomadaire avec des lignées lymphoblastoïdes autologues (LCL) irradiées en présence d’IL-2 (50 U/mL). Après transduction rétrovirale après la 3ème stimulation, les EBV-CTL-CD33?ont été maintenus en culture durant 3-4 semaines par stimulation hebdomadaire de LCL/IL-2. Le profil d’expansion des EBV-CTL-CD33?s’est révélé similaire à celui des EBV-CTL non transduits. Nous avons pu établir que les EBV-CTL-CD33?lysent les cellules tumorales CD33+ via leur récepteur chimérique, conservent leur capacité à lyser les LCL autologues via le récepteur natif, et produisent des cytokines (IFN?, GrB) en réponse aux cibles CD33+. Ces effets sont inhibés lorsque les cellules cibles sont préincubées avec un anticorps bloquant CD33. L’action spécifique des EBV-CTL-CD33?est conservée après 4 semaines de culture. L’addition du domaine intracellulaire CD28 au récepteur chimérique améliore sensiblement la lyse spécifique ainsi que la sécrétion de cytokines et la prolifération des EBV-CTL-CD33?. En revanche, l’insertion du domaine intracellulaire CD28 n’a pas d’effet notable sur la génération de cellules « mémoire » CD4+CD45RO+ ou CD8+CD45RO+. Nos résultats démontrent la possibilité de rediriger la réponse cytotoxique d’EBV-CTL contre des cibles CD33+ EBV- par expression d’un récepteur chimérique CD33?. Nous avons pu montrer que l’action spécifique et prolongée des EBV-CTL était conservée par les EBV-CTL-CD33?. Nous proposons désormais d’évaluer l’activité antitumorale des EBV-CTL-CD33?in vivo sur une leucémie myéloïde humaine CD33+ (AML10) chez la souris NOD-SCID. Nous travaillons également à la production de lignées EBV-CTL-CD33? ?de grade clinique selon les bonnes pratiques de fabrication.